细胞培养时培养基中谷氨酰胺L-glutamine的作用
对于所有的哺乳类动物细胞而言,L-glutamine(L-谷氨酰胺)是细胞生长的一种必须氨基酸,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和核酸代谢。
所有固体包装的培养基都含有L-glutamine,但L-glutamine在溶液中不稳定、易分解,商品化的液体培养基不含L-glutamine。L-谷氨酰胺在溶液中状态不稳定,经过一段时间后会降解,它的降解速率随保存时间,保存温度及保存环境pH值等变化而变化,确切的降解率一直没有确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质的重要原材料,在细胞培养中,几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。所以如果原来培养基中不含L-glutamine,应在使用前加入适量的L-glutamine。在配制多数细胞培养液时都需补加一定量的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,故应单独配制,置于-20℃ 冰箱中保存,用前加入培养液中。加有L-glutamine培养基在4℃冰箱中储存2周以上时可能已经降解,应重新加入原来量的谷氨酰胺。
各种培养基的L-glutamine的浓度不同,如M199含有0.68mM的L-glutamine,DMEM含有4mM的L-glutamine。
误区
正常情况下,如果正确使用谷氨酰胺,一般是不需要要额外补加,正确用法如下:
1. 4℃避光保存;
2. 分装,不要反复预热;
3. 含有谷氨酰胺的培养基,开封后应尽快用完。
另外,细胞中的常见的添加物还有胰岛素(Insulin)和β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol)、丙酮酸钠(Sodium Pyruvate)、L-谷氨酰胺、青霉素-链霉素
2022年11月14日 18:54