互作实验送样说明
送样说明和注意事项
一、样本收集
1. 基因模板样品
1.1 质粒载体
若提供质粒总量不低于2ug,浓度不低于50ng/ul,也可提供甘油菌1ml即可。需提供质粒测序结果,和载体图谱。可以-20℃/-80℃冰箱中贮存,冰袋或者干冰运输。
1.2 PCR产物
若提供PCR产物,请提供大于20ul的量,同时需要提供凝胶电泳图和PCR产物测序结果,可以-20℃/-80℃冰箱中贮存,冰袋或者干冰运输。
2. 组织样品
组织离体15分钟内,立即将其用消毒过的刀具切成黄豆大小(直径约0.5cm)的小块,用PBS或生理盐水洗净血液、体液等影响实验结果的残留成分。随后将样本小块置于液氮中速冻,放入EP管中保存,再放入-80℃冰箱中或者液氮罐中保存,干冰运输。
3. 细胞
3.1 贴壁细胞
吸净培养容器中的培养基,并加入PBS,用细胞铲将细胞刮入离心管中(或加入适量PBS清洗1次细胞后用胰酶消化细胞,加入血清终止反应后收集于离心管中),离心去掉上清,再加入PBS清洗细胞2次,离心后样本放入液氮或-80度冰箱中保存,细胞总量不低于107个。
3.2 悬浮细胞
将细胞悬液转移至样品管中,离心弃掉上清。去除上清后用PBS清洗细胞2-3次,直至把所有的培养基去除干净;将离心后的细胞放入液氮或-80℃冰箱中保存。细胞总量不低于107个。
3.3 甲醛交联细胞
如果您做的是ChIP染色质免疫共沉淀实验,需要先对细胞进行甲醛交联。
交联方法如下:
(1)胰酶消化收集一千万个细胞;
(2)用预冷的PBS漂洗3次,每次在4℃条件下500 g 离心5 min离心去掉上清;
(3)加入终浓度为1 %(PBS稀释)的甲醛,总体积为10 mL,室温交联10 min;
(4)加入终浓度为0.125 M 甘氨酸(PBS溶解)的甘氨酸,终止交联10min;
(5)4℃条件下500 g离心5 min,去掉上清,用预冷的pbs漂洗3次,每次在4℃条件下500g离心5 min;
(6)细胞沉淀液-80℃保存,备用。
4. 细菌悬液
将细菌悬液转移至样品管中离心,去除上清培养基,再用PBS清洗三次,清洗干净后,将菌体沉淀转移至1.5ml的EP管中,封口膜封口,管子上做好标记,将样品放入-80℃冰箱中保存,干冰运输。
样本需求量
|
验证型 |
筛选型 |
质粒 |
2ug |
2ug |
甘油菌 |
1ml |
1ml |
IP抗体 |
10ug |
15ug |
WB |
可稀释体积为20ml的抗体量 |
—— |
蛋白 |
6-10mg/组 |
10-15mg/组 |
组织 |
1g/组 |
2g/组 |
细胞 |
3*10e7/组(约3个10cm皿) |
5*10e7/组(约5个10cm皿) |
菌体 |
50ul/组 |
100ul/组 |
二、 样本准备注意事项
(1)如果EP管中加了裂解液等液体,请勿直接放入液氮中,迅速冷到可能会导致管子炸裂。
(2)各样品管上做好清晰的样品标记,尽可能简化标记、方便区分和识别。
(3)放置样本的EP管应用封口膜密封,防止样本泄露,装在密实封口袋中。封口袋上也写明样本信息,方便识别和保存。
(4)请按要求填写《实验信息表》上信息,如样本名称、数量等信息;填写好后先发送一份电子版的给项目负责人保存,寄送时再打印一份放入样本中。
(5)管上的标识要与样本信息表应相同,如不同请在《实验信息表》上另外注明。
三、样本寄送
(1)对于需要4℃运输的样品,请采用冰袋运输;
(2)对于需要干冰运输的样品,建议用厚实的泡沫盒盛放干冰(干冰最好先用厚实塑料袋装),由于干冰可以挥发,所有准备的干冰量一定要足量,建议先用塑料袋装干冰,样本深埋,封紧泡沫盒;泡沫盒外再装一个纸箱,避免运输过程中泡沫盒受损。若严格按照以上条件执行,一般10公斤干冰可以维持3~4天时间。
(3)快递样本请保证在工作日期间到达我公司。如果样品需要在周末到达,请提前与我们联系,并且寄送样本时提醒快递公司周末照常派件;如因样本在假期未能被正常派送而导致的问题,客户需承担相应损失,请知悉。