PCR实验送样说明
送样说明和注意事项
一、样本收集
1. RNA样品
提供的RNA总量不低于10ug,浓度不低于200ng/ul,尽量大于500ng/µl。A260/280应在1.8-2.0之间。需提供RNA质量检测图,变性凝胶电泳应呈现两条清晰的带。样本放入-80℃冰箱中贮存,干冰运输。
2. 组织样品
组织离体15分钟内,立即将其用消毒过的刀具切成黄豆大小(直径约0.5cm)的小块,用PBS或生理盐水洗净血液、体液等影响实验结果的残留成分。随后将样本小块置于液氮中速冻,放入EP管中保存,再放入-80℃冰箱中或者液氮罐中保存,干冰运输。
3. 细胞
3.1 贴壁细胞
吸净培养容器中的培养基,并加入PBS,用细胞铲将细胞刮入离心管中(或加入适量PBS清洗1次细胞后用胰酶消化细胞,加入血清终止反应后收集于离心管中),离心去掉上清,再加入PBS清洗细胞2次,离心后样本放入液氮或-80度冰箱中保存,细胞总量不低于107个。
如果要裂解样本,吸净培养容器中的培养基,并加入PBS洗几次后弃去PBS,加入适当体积的裂解液(依据裂解液说明书),用细胞铲将细胞刮入裂解液中。将细胞裂解液转移到样品管中。
3.2 悬浮细胞
将细胞悬液转移至样品管中,离心弃掉上清。去除上清后用PBS清洗细胞2-3次,直至把所有的培养基去除干净;将离心后的细胞放入液氮或-80℃冰箱中保存。细胞总量不低于107个。
样本放入-80度冰箱中暂存。加入适当体积的裂解液(依据裂解液说明书)。反复吹吸直至清亮。
4. 细菌悬液
将细菌悬液转移至样品管中离心,去除上清培养基,再用PBS清洗三次,清洗干净后,将菌体沉淀转移至1.5ml的EP管中,封口膜封口,管子上做好标记,将样品放入-80℃冰箱中保存,干冰运输。
如果要裂解样本,加入适当体积的裂解液(依据裂解液说明书)。反复吹吸直至清亮。
5. 血液样品
5.1 全血
采集新鲜血液放置抗凝管或血袋中保存,样本量大于2ml,需当天送达,4℃运输。或者新鲜血液分离白细胞,分离后的白细胞样本放入-80℃冰箱中保存,干冰运输。
如需提取RNA,建议采用专用的全血样品RNA提取试剂盒抽提RNA,如QIAamp RNA Blood Mini Kit。
5.2 血清
使用非抗凝管(或无热原无内毒素的离心管)采集血液样本,室温下静置1-3个小时不等或4℃静置过夜使其自然凝固,2000-3500转/分4℃低温离心10-20min,吸取收集上清,血清需要量为200ul,如量较多建议分装保存,避免反复冻融,-80℃冰箱中保存,干冰运输。
如需裂解样品,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入-80℃冰箱保存,干冰运输。
5.3 血浆
使用抗凝管(可根据样本选择EDTA、肝素钠、柠檬酸钠或枸橼酸纳作为抗凝剂)采集血液样本,混合10-20分钟后,2000-3000转/分4℃条件离心20分钟(或4000转/分离心5min),仔细吸取收集上层液体,血清需要量为200ul,如量较多建议分装保存,避免反复冻融,-80℃冰箱中保存,干冰运输。
如需裂解样品,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入-80℃冰箱保存,干冰运输。
二、 样本准备注意事项
(1)如果EP管中加了裂解液等液体,请勿直接放入液氮中,迅速冷到可能会导致管子炸裂。
(2)各样品管上做好清晰的样品标记,尽可能简化标记、方便区分和识别。
(3)放置样本的EP管应用封口膜密封,防止样本泄露,装在密实封口袋中。封口袋上也写明样本信息,方便识别和保存。
(4)请按要求填写《实验信息表》上信息,如样本名称、数量等信息;填写好后先发送一份电子版的给项目负责人保存,寄送时再打印一份放入样本中。
(5)管上的标识要与样本信息表应相同,如不同请在《实验信息表》上另外注明。
三、样本寄送
(1)对于需要4℃运输的样品,请采用冰袋运输;
(2)对于需要干冰运输的样品,建议用厚实的泡沫盒盛放干冰(干冰最好先用厚实塑料袋装),由于干冰可以挥发,所有准备的干冰量一定要足量,建议先用塑料袋装干冰,样本深埋,封紧泡沫盒;泡沫盒外再装一个纸箱,避免运输过程中泡沫盒受损。若严格按照以上条件执行,一般10公斤干冰可以维持3~4天时间。
(3)快递样本请保证在工作日期间到达我公司。如果样品需要在周末到达,请提前与我们联系,并且寄送样本时提醒快递公司周末照常派件;如因样本在假期未能被正常派送而导致的问题,客户需承担相应损失,请知悉。