CKK8法检测细胞增殖

1. 技术简介

细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础，是生物体的重要生命特征。检测细胞在培养基或组织中的生长速率，对于细胞生长和分化研究至关重要。细胞增殖检测主要分为5类：DNA合成检测、细胞代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度检测。CKK8法检测细胞增殖主要基于检测细胞代谢活性，在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，通过添加四唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定，四唑盐作为脱氢酶的底物在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，活细胞能将四唑盐还原成有色的甲瓒或甲瓒盐（Formazan），可通过分光光度计或酶标仪检测含染料培养基的吸光度值，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞的增殖情况。MTT、XTT、MTS和WST1是四种最常见的四唑盐。

WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高，Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，具体是利用WST-8四唑盐在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。

2. 实验流程

（1） 制备细胞悬液：细胞计数

（2）接种到96孔板中，每个样本进行3次重复。

 （3）37℃培养箱中培养，收集各个时间点的细胞进行检测。

 （4）加入10ul CCK8溶液，比例为1/10,96孔板的培养基为100ul,故加入10ul的CKK8溶液；

 （5）孵育4小时

（6）用酶标仪测定OD450nm的吸光度值。

3. 技术优势

（1）酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰；

（2）WST-8的细胞毒性非常低，因此可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到佳测定时间。

4. 结果案例