免疫荧光

1. 技术简介

免疫荧光（immunofluorescence technic）技术原理是根据抗体-抗原特异结合，以荧光物质标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原而进行抗原定位的技术，是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。其实该技术有两种方法：用荧光抗体示踪相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪相应抗体的方法称荧光抗原法。但是在实际工作荧光抗体方法较常用。

2. 实验对象

（1）组织样本；
（2）已包埋的石蜡组织；
（3）切片；
（2）细胞。

3. 客户提供

（1）待测的目的基因信息（物种、Genebank登录号或基因序列）

（2）实验样本及其信息（样本类型、样本分组情况和样本量）

（3）检测用的抗体。

4. 结果交付

（1）原始显色成像图及处理图；

（2）实验的样本和实验剩余样品；

（3）详细的实验报告（包含实验仪器、耗材和试剂、实验方法、结果分析）。

5. 实验流程

以检测细胞为例。

（1）将细胞接种与细胞爬片上，使其汇合度为40%-50%，第二天后，即可进行免疫荧光实验；

（2）将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次；

（3）用4%的多聚甲醛固定，之后用PBS浸洗3次；

（4）0.5% Triton X-100室温通透20min;

（5）用PBS浸洗3次；

（6）加入稀释好的一抗，4°C孵育过夜；

（7）PBST浸洗3次，加入荧光二抗，室温孵育1h，PBST浸洗3次；

（8）DAPI染色：加入DAPI避光孵育5min，对样本进行染核，PBST浸洗4次；

（9）加入荧光猝灭剂封片页封片，荧光显微镜下采集图像。

4. 结果案例