1. 技术简介

Label-free)非标蛋白质组定量技术是一种不依赖于同位素标记的新型蛋白质定量技术，该技术对蛋白质酶解肽段进行分析，无需昂贵的稳定同位素标签做内部标准，直接通过液质联根据质谱峰的强度来对比较不同样本中相应肽段的信号强度，从而对肽段或蛋白进行相对定量。

2. 实验原理

Label-free是一种非标记的差异蛋白质组学技术，该技术不使用同位素标记物，而是直接根据质谱峰的强度来对肽段或蛋白进行相对定量。首先，不同样本提取的蛋白质经酶解后产生的肽段分别采用LC-MS/MS技术分离，检索原始质谱数据，解析出不同样本中各个肽段的定量信息，进而获得蛋白质在不同样本中的定性和定量信息。

目前基于质谱的非标记定量技术涉及有两种算法： 一种是以肽段的色谱峰强度(peak intensity)和峰面积(peak area)等信息比较一对样本获得蛋白相对定量，另一种是依据蛋白质对应肽段的二级质谱总数(spectral counts)进行定量。

3. 实验流程

（1）收集样本并分别对样本进行蛋白质提取定和定量；

（2）对蛋白质进行进行酶解，得到多肽混合物；

（3）对肽样品进行LC-MS/MS质谱检测。

（4）将质谱相关数据经过软件处理，结合数据库对比分析，可获得不同样品间相同肽段的定量信息。

4． 技术优势

（1）不需要同位素标签，排除了标记过程带入实验误差的风险，同时也不必考虑标记效率的问题，实验耗费低。

（2）对样品中蛋白质总量要求较低，实验周期短，实验费用低。

（3）不受样品条件的限制，克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。

（4）对实验操作稳定性、重复性要求高，要求至少做三次技术重复或生物重复。