慢病毒包装

 

1. 技术简介

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I型病毒）为基础改造而来，是逆转录病毒的一种，所以称之为“慢”病毒，Lenti在拉丁文中就是慢的意思。慢病毒包装是将外源基因包装到病毒的外壳中，利用病毒对宿主细胞的感染性，将外源基因整合到细胞基因组内的技术。慢病毒具有转染效率高、可以永久表达目的基因以及高度安全性等特点，可以用于获得稳转细胞株和转基因动物。

 

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2. 慢病毒包装系统介绍
（1）慢病毒载体，含有外源基因片段、外源基因的启动子，以及其它病毒包装、整合所需的顺式作用元件；
（2）包装质粒：含有病毒包装所必需的反式作用元件；通常由2-3个质粒组成，含有3个组要结构蛋白，gag：编码病毒的主要结构蛋白；pol：编码病毒蛋白水解酶、逆转录酶和整合酶；env(VSV-G) :编码病毒包膜蛋白
（3）表达慢病毒用的包装细胞：通常是用293T 细胞株，能够在慢病毒载体和包装质粒共转染后产出慢病毒。

 

 

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3. 慢病毒包装方法

图1 慢病毒包装流程图

 

携带外源基因的慢病毒载体与包装质粒共转染包装细胞，一段时间后收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，经浓缩和纯化后获得慢病毒液。

 

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4. 慢病毒的优势

（1）宿主范围广，可以感染分裂或者非分裂的细胞，也可以感染质粒较难感染的细胞；

（2）具有整合性，可携带外源基因整合到宿主中，在靶细胞中得到持续高效稳定的表达

（3）包装容量大，可以携带大约5kb的外源片段

（4）滴度高，通常滴度可以达到108~1010 TU/mL。

 

 

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5. 慢病毒包装的滴度结果案例

 

根据以上滴度检测结果，图例中的慢病毒的滴度大于2x108TU/ml。