慢病毒包装

 

1. 技术简介

慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷I型病毒)为基础改造而来,是逆转录病毒的一种,所以称之为病毒,Lenti在拉丁文中就是慢的意思。慢病毒包装是将外源基因包装到病毒的外壳中,利用病毒对宿主细胞的感染性,将外源基因整合到细胞基因组内的技术。慢病毒具有转染效率高、可以永久表达目的基因以及高度安全性等特点,可以用于获得稳转细胞株和转基因动物。

 


 

 

2. 慢病毒包装系统介绍
(1)慢病毒载体,含有外源基因片段、外源基因的启动子,以及其它病毒包装、整合所需的顺式作用元件;
(2)包装质粒:含有病毒包装所必需的反式作用元件通常由2-3个质粒组成,含有3个组要结构蛋白,gag:编码病毒的主要结构蛋白;pol:编码病毒蛋白水解酶、逆转录酶和整合酶;env(VSV-G) :编码病毒包膜蛋白
(3)表达慢病毒用的包装细胞:通常是用293T 细胞株,能够在慢病毒载体和包装质粒共转染后产出慢病毒。

 

 


 

 

3. 慢病毒包装方法

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1 慢病毒包装流程图

 

携带外源基因的慢病毒载体与包装质粒共转染包装细胞,一段时间后收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,经浓缩和纯化后获得慢病毒液。

 


 

 

4. 慢病毒的优势

(1)宿主范围广,可以感染分裂或者非分裂的细胞,也可以感染质粒较难感染的细胞;

(2)具有整合性,可携带外源基因整合到宿主中,在靶细胞中得到持续高效稳定的表达

(3)包装容量大,可以携带大约5kb的外源片段

(4)滴度高,通常滴度可以达到108~1010 TU/mL。

 

 


 

 

5. 慢病毒包装的滴度结果案例

LTF梁城第1孔荧光图片

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LTF梁城第3孔荧光图片

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根据以上滴度检测结果,图例中的慢病毒的滴度大于2x108TU/ml

 

 

 

 

2022年4月7日 17:03
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