ChiP 染色质免疫沉淀

1. 技术简介

染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation assay, CHIP）是目前研究体内 DNA 与蛋白质相互作用的方法。 它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA 复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的DNA小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA 片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。CHIP 不仅可以检测体内转录因子因子与 DNA 的动态作用，还可以用来研究组蛋白的共价修饰与基因表达的关系。

2. 技术原理

ChIP染色质免疫共沉淀线路图

3. 方法介绍

在保持组蛋白和 DNA 联合的同时，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，染色 质被切成很小的片断，并沉淀下来。 IP 是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合。其一般实验过程如下：

（1）甲醛处理固定细胞收集细胞

（2）对细胞进行裂解，并超声破碎DNA

（3）加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合

（4）加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物

（5）对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合

（6）洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物

（6）解交联，纯化富集的DNA片断

（7）对分离得到的DNA片段进行PCR分析或者测序分析。

3. 客户提供

（1）目的蛋白基因信息（物种、Genebank登录号或基因序列）

（2）目的蛋白抗体，若无抗体，可提供目的基因的质粒，构建融合标签的目的蛋白质粒；

（3）实验样本及其信息（样本类型、样本量）.

4. 结果交付

（1）诱饵蛋白的Western blot检测数据；

（2）剩余的实验的样本和ChIP产物；

（3）qPCR结果（或者SEQ鉴定结果）；

（4）详细的实验报告（包含实验仪器、耗材和试剂、实验方法、结果分析）