从组学筛选到分子机制研究
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为研究基因的功能,需要对基因进行操作,基因过表达技术是指将目的基因构建到表达启动子下游,转入细胞后实现基因表达量升高的目的,对研究未知基因功能、调控已知功能基因的表达等,构建相应的过表达载体是最常规的实验方法。载体构建可以实现对基因过表达、干扰、突变、插入或者缺失等,其原理是利用限制性内切酶、DNA连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和DNA载体进行切割后,将二者链接在一起后导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞中正确表达。
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表达与定位是基因蛋白最基本的性质。基因在不同的表型/疾病下其表达量也会发生改变,基因表达通过转录、剪切、翻译或翻译后修饰实现对下游基因的调控。基因表达是基因产生表型的最基本呢水平,基因表达水平对生物体的发育至关重要。
为研究基因在细胞中的作用,需要将基因转到细胞中进行表达、干扰。我们可以对基因进行瞬时过表达、干扰,也可以在细胞的基因组上插入感兴趣的目的基因,并筛选稳定表达干扰的细胞株。
通过细胞实验可以实现对基因的表达研究,可以研究其在生长、运动、功能等方面的情况。可提供细胞原代、传代培养,细胞克隆形成实验,细胞模型构建,瞬时转染/稳定转,CCK8检测,Transwell,细胞划痕,细胞黏附等检测。
在分子机制研究中,蛋白与蛋白互作研究是非常经典的。除了蛋白与蛋白互作外,还有蛋白与核酸的互作。细胞间的分子通常是相互结合,相互调控的,通过该研究可筛选结合的分子或者验证分子间是否存在结合。
RNA结合蛋白免疫共沉淀
随着科学研究的进展,人们发现单纯研究某一方向无法解释全部生物医学问题。依照中心法则,DNA(基因组学)转录为mRNA(转录组学),接着翻译为蛋白质(蛋白质组学),这些蛋白质可催化产生或作用于代谢产物(代谢组学)、糖蛋白和碳水化合物(糖组学)以及各种脂质(脂质组学)的化学反应。
转录组学
蛋白组学
代谢组学